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NIBSC89/548介白素6该如何使用?

发布时间: 2025-10-28  点击次数: 11次
  NIBSC89/548介白素6是WHO规定的用于IL-6检测的国际标准品。在实验中,它为各种检测方法提供了一个准确、可靠的参照基准。例如在使用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人白细胞介素-6(IL-6)的水平时,该标准品可用于构建标准曲线。具体来说,向预先包被了人白细胞介素-6单克隆抗体的酶标孔中加入不同稀释度的NIBSC89/548介白素6以及其他待测样本,然后通过一系列反应来定量分析IL-6的含量。
 
  基于抗原抗体的特异性识别原理,NIBSC89/548中的IL-6分子能够与特定的抗IL-6单克隆抗体发生准确结合。这种特异性结合保证了在复杂的生物样品环境中,只有目标IL-6会被有效捕获和检测,从而排除其他干扰物质的影响,提高检测的准确性。
 
  在ELISA等检测方法中,结合后的复合物会进一步引发后续的信号转换和放大过程。通?;嵋朊副昙堑亩够蚱渌咀傥镏剩钡孜锎嬖谑?,会产生可观测的信号变化,如颜色改变或荧光发射等。通过对这些信号强度的测量,可以间接反映出样品中IL-6的浓度。
 
  NIBSC89/548介白素6的使用步骤:
 
  1.样本准备:收集待测样本,如血清、血浆或其他体液。确保样本采集过程符合标准程序,避免污染和溶血等情况影响结果准确性。
 
  2.试剂与耗材准备:准备好所需的试剂盒组件,包括包被有特异性抗体的微孔板、标准品、检测抗体、酶结合物、底物溶液以及洗涤液等。同时检查所有试剂是否在有效期内且储存条件适宜。
 
  3.加样与孵育:将适当稀释后的样本加入到预先包被了抗IL-6单克隆抗体的微孔中,并设置一系列已知浓度的标准点以建立标准曲线。然后进行第一次温育,使样本中的IL-6与固相上的抗体充分结合。
 
  4.洗涤去除未结合成分:使用特定的洗涤缓冲液清洗微孔板,去除未结合的物质和其他干扰因素。
 
  5.加入检测抗体与二次孵育:向每个孔中添加标记过的检测抗体(通常是HRP标记),再次进行温育,让检测抗体与已结合在板上的目标分子相互作用。
 
  6.显色反应:加入底物溶液启动显色反应,通常使用的是TMB(四甲基联苯胺)。在HRP酶催化下,TMB会转变为蓝色产物,颜色的深浅与样本中IL-6的含量成正比。
 
  7.终止反应并读数:通过加入酸性终止液停止显色反应,随后使用酶标仪测量各孔的光密度值(OD值)。根据标准曲线计算出样品中IL-6的实际浓度。
NIBSC89/548介白素6
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