ERM-DA482 脑脊液中的ABETA 42标准品是三种脑脊液（脑脊液）认证的参考物质(CRMs)的一部分，其中包含不同水平的淀粉样β1-42肽(Aβ1-42)。这三个crm(ERM-DA480/IFCC、ERMDA481/IFCC和ERM-DA482/IFCC)是在欧盟委员会联合研究中心的责任下生产和认证的。制备ERM-DA482/IFCC的起始材料是通过连续腰椎引流术从常压脑积水患者中收集的人脑脊液。

制备工艺与定值技术

1. 生产质控体系

遵循 JRC-IRMM 蛋白类参考物质制备规范（IRMM/ENV 15144）及 ISO 17034 要求，核心流程聚焦 ABETA 42 的稳定性与纯度控制：

重组表达与纯化：将ERM-DA482 脑脊液中的ABETA 42标准品 ABETA 42 基因克隆至 pET-28a 载体，HEK293 细胞悬浮培养，采用镍柱亲和层析（His 标签纯化）→ 离子交换层析（Q Sepharose）→ 凝胶过滤层析（Superdex 75）三步纯化，SDS-PAGE 验证纯度≥99%，HPLC 检测聚集率＜1%；

基质匹配与冻干：将纯化 ABETA 42 与去蛋白脑脊液按比例混合，程控冻干（预冻 - 70℃，升华压力 0.05 mbar，解析干燥 48 h），确保蛋白回收率≥92%，冻干后水分含量＜3%；

质控验证：通过圆二色谱（CD）验证 ABETA 42 二级结构（β 折叠含量＜10%，避免提前聚集），-80℃储存稳定性已验证 36 个月（浓度衰减≤4%），瓶间均匀性采用 LC-MS/MS 检测（CV≤2.5%）。

2. 联合定值方法

采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的 LC-MS/MS 参考方法，联合 5 家国际权l威机构（德国 BAM、法国 LNE、英国 NPL、美国 NIST、中国计量院）同步定值，核心流程：

样品前处理：ERM-DA482 脑脊液中的ABETA 42标准品溶解后，加入 13C/15N 同位素标记的 ABETA 42 内标（浓度 20 pg/mL），胰蛋白酶酶解（37℃，4 h），固相萃?。⊿PE，C18 柱）富集肽段；

LC-MS/MS 检测：采用反相色谱柱（Acquity UPLC BEH C18，2.1×100 mm），流动相为 0.1% 甲酸水 - 0.1% 甲酸乙腈，梯度洗脱（乙腈 0-40%，30 min），三重四极杆质谱（AB Sciex QTRAP 6500）多反应监测（MRM）模式，监测特征肽段（m/z 622.3→776.4，内标 m/z 625.3→782.4）；

定值一致性与不确定度：5 家机构检测结果相对偏差≤3.2%，不确定度主要来源于：酶解效率波动（贡献 35%）、质谱响应偏差（贡献 28%）、基质不均匀性（贡献 20%），最终扩展不确定度（k=2）为 5.2%-12.0%。

东莞市百顺生物科技有限公司专业提供ERM-DA482 脑脊液中的ABETA 42标准品，欢迎咨询定购。