NIBSC05/112肝素的核心功能是通过调节凝血酶(Thrombin)和Xa因子等关键凝血蛋白的活性,阻断血液凝固级联反应。其作用机制可分为以下步骤:
1.抗凝血酶III(AT III)依赖性抑制
肝素分子中的特异性五糖序列(如GlcNS-IdoA-GlcNAc-IdoA-GlcNS)与血浆中的抗凝血酶III结合,诱导其构象改变,增强AT III对凝血酶(IIa因子)和Xa因子的抑制效率。这一过程使凝血酶无法将纤维蛋白原转化为纤维蛋白,从而阻止血栓形成。
2.选择性抑制模式
-普通肝素(UFH):分子量分布广(3-30 kDa),可同时抑制IIa和Xa因子,但需频繁监测APTT(活化部分凝血活酶时间)。
-低分子量肝素(LMWH):通过化学或酶解法去除部分多糖链,保留主要抑制Xa因子的能力,半衰期延长至4-6小时,出血风险降低。
3.血管内皮?;ぷ饔?br />
肝素还可结合血管内皮细胞表面的受体,促进组织因子途径抑制物(TFPI)释放,进一步抑制外源性凝血途径,并减少血小板黏附。
NIBSC05/112肝素主要用于校准实验室的检测方法(如抗凝血活性测定)。其测定通常采用基于发色底物的抗Xa活性检测法,步骤如下:
1.试剂准备
-复溶标准品:按说明书要求用无菌水或缓冲液复溶冻干粉,充分混匀。
-配制工作溶液:根据实验需求稀释至适当浓度范围(如0.05-0.5 IU/mL)。
-准备样本:待测肝素样品需与标准品处理方式一致(如稀释、过滤除菌)。
2.加样与反应
-在微孔板中加入标准品、质控品和待测样本。
-加入过量抗凝血酶III(AT III),形成肝素-AT III复合物。
-加入发色底物(如S-2765),复合物催化底物水解,释放显色基团。
3.显色与检测
-终止反应后,用酶标仪在405 nm波长处测定吸光度(OD值)。
-根据标准曲线计算待测样本的抗Xa活性(IU/mL)。
4.数据分析
-绘制标准品浓度-吸光度曲线,拟合四参数逻辑模型。
-对比待测样本与标准品的活性差异,校正实验室结果。